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蛋白质晶体板制作

设计并制作了一种在微腔中对蛋白质进行微批量法(microbatch)结晶的碟式微流控结晶芯片,它是一种高通量、低成本、低耗样量(纳升级)、操作简便的蛋白质结晶筛选方法,这种芯片能成功地结晶溶菌酶(lysozyme)和青色荧光蛋白(CyPet).为了系统地比较这种微流控芯片与传统的使用蒸汽扩散法的24孔结晶板的结晶能力,用3个Hampton结晶***盒,在4℃及20℃培养条件下分别对5种标准蛋白(溶菌酶(lysozyme)、木聚糖酶(xylanase)、脂肪酶B(lipase B)、葡萄糖异构酶(glucose isomerase)和嗜热菌蛋白酶(thermolysin))进行了结晶筛选实验.结果表明,在4℃时微流控芯片与24孔结晶板有相近数目的结晶条件(91 vs 98)。

蛋白结晶板

为满足固相时间分辨荧光分析(TRFIA)研究需要,采用固相载体改进技术研制用于检测系统的聚微孔板,不仅提高TRFIA系统的灵敏度,而且可以把该技术应用到其他分析技术、生物芯片技术、污水处理、发酵工艺、酶工程和亲和层析,具有重要的现实意义。本文将聚微孔板内表面固相功能化,研制一种在聚微孔板内表面形成耐受强酸、强碱、的尼龙-6膜层,并在膜层表面化得到活性基团与己二酸二酰肼进行“手臂”连接,用双功能基团活化,活化后的膜层与蛋白质具有很高的连接性能和稳定性。

蛋白结晶板过程

概括了蛋白质结晶的基本过程,阐述了蛋白质结晶的早期发展历程,***介绍了蛋白质结晶的近期研究状况,主要包括:形核机理的研究,结晶条件的筛选和结晶技术的优化以及基于结构的设计技术.特别是对离子液体在蛋白质结晶过程中的应用及发展前景进行了讨论，

论述了国内外生物大分子(蛋白质,酶等)沉淀结晶的研究现状和进展,着重从结晶热力学,粒子聚集,结晶的成核与晶体生长,以及场的作用等方面阐述了蛋白质沉淀结晶过程的特定现象与可能的结晶机理,对蛋白质的沉淀结晶过程作了的描述,并提出未来研究方向,为蛋白质结构分析,新药设计,生化研究以及工业化生产提供一定的基础。