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发布时间:2021-11-11 14:22:07
蛋白质结晶涉及四个重要步骤
1. 蛋白质纯度的确定。如果不够非常纯,必须要进一步纯化。
2. 蛋白质溶解于合适的溶剂中,从中它能通过一种盐或有机化合物而析出。溶剂通常是水-缓冲剂溶液,有时加,如2--2,4-(MPD)。正常情况下,沉淀剂也被加入,但是浓度不高于使沉淀产生。对于不溶于水-缓冲剂或水-的膜蛋白,还需要加入去污剂。
3. 使溶液过饱和。在这一步中,小聚集体形成,它是晶体生长所需的核。对小分子的结晶来说,相比于蛋白质更为人熟知,晶核的自发形成需要提供表面张力能。一旦这个能障被突破了,晶体开始生长。能障在高水平的过饱和度时很容易克服。因此,在高过饱和度时,晶核更易自发形成。晶核的形成可作为一个过饱和度和其他参数的函数通过多种方法来研究,包括光散射、荧光去极化及电子显微镜。
4. 一旦晶核形成,晶体生长正式开始。对低分子量的化合物而言,新分子会逐步结合到正在生长的晶体表面。这是由于这些位置的结合能比较大,相对于分子结合到平滑的表面。这些步骤要么由晶系缺陷造成,要么发生在表面随机形成的晶核。
蛋白结晶板技术
提出来的一项新型的分析技术,是当前分析科学活跃的发展领域之一,代表了新世纪分析仪器的发展方向。微流控芯片的发展有赖于不断出现的微机电加工技术,微流控芯片的结构越来越复杂,功能也越来越多样化,由此,研究和探索简便的加工技术成为微流控技术发展的一个重要组成部分,本的研究工作将围绕着微流控蛋白质结晶芯片不同材料的性能与功能要求来进行相关加工技术的探讨。 蛋白质结晶微流控芯片是一种用于蛋白质结品条件高通量、快速筛选的新设备,对于结构生物学的发展具有重要意义,是目前研究的热点。本根据蛋白质结晶系统的要求,设计了具有双层结构的微流控芯片。
蛋白结晶板
形核剂的添加使蛋白质晶体异相形核,相较于均相形核其需要克服的阻力小,形核势垒低.因而形核剂的使用对于难结晶蛋白或者起始浓度过低的蛋白质结晶具有重要意义.随着结构生物学的发展,形核剂在蛋白质结晶中的研究仍是结晶方法学领域的热点问题.多孔微球对蛋白质分子的吸附作用有利于无序蛋白质分子团簇的形成,进而促进蛋白质形核.添加多孔微球不但可以增加结晶条件筛选数,也可以提高晶体质量.促进蛋白质分子有序排列的形核剂籽晶的使用,使晶体的形核生长过程始终处于结晶体系溶液浓度较低的状态,而交联的籽晶因为稳定性更高而更有应用前景.新型交互扩散结晶板中。
蛋白质晶体板
研究蛋白质晶体板结构的物理化学分支学科。蛋白质分子是由上百或更多的α-氨基酸作为单体缩合而成的多肽(见肽)链构成的。能构成蛋白质中多肽链的α-氨基酸总共有 20种L-氨基酸。
甘氨酸的R基为一个氢原子,而其他氨基酸的R基分别为脂肪侧链、带羟基的脂肪侧链、带芳香环的侧链、碱性侧链、带羧酸基的侧链、带酰胺基的侧链和含硫侧链等。脯氨酸的侧链是一个丙二基(-CH2-CH2-CH2-),一端与Cα相连,另一端则与脯氨酸中氨基的氮原子相连,形成一个五元环,并使其中氨基成为一个仲氨基,而在其他氨基酸中都是伯氨基。这样,脯氨酸缩合到多肽中后所得残基在氮原子上已无氢原子。
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