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发布时间:2021-11-18 08:38:28
蛋白质结晶涉及四个重要步骤
1. 蛋白质纯度的确定。如果不够非常纯,必须要进一步纯化。
2. 蛋白质溶解于合适的溶剂中,从中它能通过一种盐或有机化合物而析出。溶剂通常是水-缓冲剂溶液,有时加,如2--2,4-(MPD)。正常情况下,沉淀剂也被加入,但是浓度不高于使沉淀产生。对于不溶于水-缓冲剂或水-的膜蛋白,还需要加入去污剂。
3. 使溶液过饱和。在这一步中,小聚集体形成,它是晶体生长所需的核。对小分子的结晶来说,相比于蛋白质更为人熟知,晶核的自发形成需要提供表面张力能。一旦这个能障被突破了,晶体开始生长。能障在高水平的过饱和度时很容易克服。因此,在高过饱和度时,晶核更易自发形成。晶核的形成可作为一个过饱和度和其他参数的函数通过多种方法来研究,包括光散射、荧光去极化及电子显微镜。
4. 一旦晶核形成,晶体生长正式开始。对低分子量的化合物而言,新分子会逐步结合到正在生长的晶体表面。这是由于这些位置的结合能比较大,相对于分子结合到平滑的表面。这些步骤要么由晶系缺陷造成,要么发生在表面随机形成的晶核。
蛋白质晶体板结构
蛋白质晶体板晶体中的肌红蛋白结构会不会与溶液或中的很不一样?将溶液、和晶体中肌红蛋白的活性、吸收光谱、α-螺旋含量加以对比,即可打消这个顾虑。另外,海豹的肌红蛋白和鲸的肌红蛋白晶型很不一样,但结构都很一致,从而说明这个具有活性的三级结构的性。血红蛋白由四条多肽链组成,记号为α2β2。它们各与血红素结合,形成四个亚基。四个亚基聚集在一起的方式称为四级结构。亚基之间残基的顺序都有些差别,但结构很相似。
蛋白结晶板发展
可明显提高其结晶成功率及晶体质量.随着该方面成功案例的不断积累,分子改造技术越来越凸显出其在蛋白质结构解析中的重要作用,特别是对一些难以结晶或提高晶体质量的蛋白质而言,其应用价值更不可忽视.针对近年来分子改造技术在蛋白质结晶中的应用进行了回顾与总结,并展望了其未来的发展。
在高密度微孔板技术和DNA微阵列技术的基础上发展起来的蛋白质芯片技术,能够在蛋白质水平上进行***高通量表达分析,从而成为蛋白质组学研究的有效方法.蛋白质芯片依靠手工,压印或喷墨的方法将探针蛋白点样在化学膜,凝胶,微孔板或玻片上形成阵列,经过与样品的杂交捕获靶蛋白。
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